Як позбутися неспецифічних смуг ПЛР?
Скорочення часу циклу – Це особливо корисно, коли концентрація шаблону вища. Дотримуйтесь 20-35 циклів. 3. Скоротіть час подовження/Збільшіть температуру відпалу – обидва ці способи допоможуть покращити результати ПЛР за рахунок зниження частоти неспецифічного зв'язування та розмазування смуг.
Як запобігти неспецифічному зв'язуванню в ПЛР?
Збільшіть температуру відпалу : Підвищуючи температуру відпалу, ви підвищуєте специфічність. У загальному випадку, ви хочете використовувати температуру відпалу, яка на 5 ° C нижче, ніж T m ваших праймерів.
Як зменшити кількість смуг у ПЛР?
Інтенсивність множинних смуг збільшувалася зі збільшенням числа циклів ПЛР. Множинні смуги зникали просто шляхом зменшення числа циклів ПЛР і відтворювалися з окремих специфічних продуктів ПЛР, які зазнавали поперемінної денатурації та реасоціації без подовження праймера.
Який простий крок можна зробити для зменшення кількості неспецифічного зв'язування праймера з метою збільшення виходу ДНК основної більшої смуги ПЛР?
Використання температури відпалу, що трохи перевищує Tm праймера, збільшить строгість відпалу і може мінімізувати неспецифічний відпал праймера і зменшити кількість небажаних продуктів, що синтезуються.